本制品是即用型腔肠素h,特别设计用于Renilla luciferase体内活体成像研究。最小化产品成分的变化、冻融次数和严格控制批间差异确保结果的高重复性。
- 溶于丙二醇和柠檬酸,稳定性高,即开即用,无需考虑粉末配制液体过程造成的稳定性差异;
- 批次间严格控制差异,特别设计用于体内研究;
- 即用型产品,减少时间和精力;
- IVIS成像系统验证,保证成像质量。
腔肠素h(Coelenterazineh)是海肾荧光素酶(Rluc)和Gaussia荧光素酶(Gluc)等多种荧光素酶的作用底物,其发光强度比天然腔肠素高10倍以上,适用于报告基因分析。也是水母发光蛋白的辅助因子,可用于检测活细胞中钙离子浓度。
腔肠素(Coelenterazine)是自然界中资源最丰富的天然荧光素,是绝大多数海洋发光生物(超过75%)的光能贮存分子。腔肠素可作为许多荧光素酶的底物,比如海肾荧光素酶(Rluc),Gaussia分泌型荧光素酶(Gluc),以及包括水母发光蛋白(aequorin)和薮枝螅发光蛋白(Obelia)在内的光蛋白(Photoproteins)。其发光原理是:以腔肠素为底物的荧光素酶在有分子氧的条件下,氧化腔肠素,产生高能量的中间产物,并在此过程中发射蓝色光,峰值发射波长约为450~480nm。
腔肠素作为水母发光蛋白复合物(Aequorin)的组成成分,只有与钙离子(Ca2+)结合后,才能被氧化生成高能量产物Coelenteramide,同时释放出CO2和蓝色荧光(~466nm)。其具有以下几个优点:
- 能检测较大范围的Ca2+浓度(0.1~100μM);
- 样品无自体荧光,背景荧光较低,尽管信号较荧光钙离子指示剂弱,但信噪比更高,因此具有较高灵敏度;
- Aequorin能够稳定维持在细胞内,能够进行数小时至数天Ca2+的监测。
腔肠素具有能量转移(Bioluminescence Resonance Energy Transfer,BRET)的特性:在底物腔肠素存在的情况下,荧光素酶(如Rluc)催化底物发生蓝光,能量转移到EYFP(增强的黄色荧光蛋白),发出绿光(~530nm)。通过Rluc融合蛋白和EYFP融合蛋白两者间的相互关系研究蛋白-蛋白之间的相互作用。BRET的信号可通过比较绿光和蓝光的量来进行测定,消减了因细胞数、细胞类型和其他实验变量而引起的数据变量。
- 活体成像。
- 报告基因检测。
- 检测细胞/组织内活性氧(ROS)水平:细胞和组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子能够增强腔肠素在酶非依赖性的氧化体系中自发荧光。
- 高通量筛选。
- 监测活细胞内钙离子水平。
组分 | 规格 |
即用型腔肠素h(150μg/mL) | 10×1.2mL |
说明书 | 1份 |
保存:-20℃避光。长期保存置于-80℃避光,有效期一年。
- 准备工作
实验前,取出-20℃或更低温度保存的即用型腔肠素h,37℃水浴锅解冻,稍微漩涡混匀后即可使用。
注:避免反复冻融,务必根据实际用量取出所需剂量产品。 - 注射方法及剂量
- 静脉注射:推荐剂量15μg/mouse (100μL/mouse)。使用1mL注射器直接从瓶内吸取溶液后,用25 gauge或更高的针头注射入小鼠体内。尽快成像检测以获得峰值信号。
注:静脉给药后小鼠可能经历短时间痉挛,但能够快速恢复。 - 腹腔注射:推荐剂量是30μg/mouse (200μL/mouse)。方法同上。
- 静脉注射:推荐剂量15μg/mouse (100μL/mouse)。使用1mL注射器直接从瓶内吸取溶液后,用25 gauge或更高的针头注射入小鼠体内。尽快成像检测以获得峰值信号。
附录1.腔肠素及其衍生物的特性
货号 | 产品名称 | 基本描述 | Em (nm) | RLC* | Relative Intensity | Half-rise time (ms)** |
SY0234 | 天然腔肠素 | 水母发光蛋白的辅助因子,高灵敏度化学发光法检测Ca2+浓度(0.1~100μM)。常用作Rluc和Gluc等荧光素酶的报告基因检测底物。BRET分析,以及细胞/组织样本中的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子的化学发光检测。快速再生能力比较重要的实验推荐使用本底物。 | 466 | 1.00 | 1 | 6-30 |
SY0235 | 腔肠素h | 一种水母发光蛋白复合物,其发光强度比天然腔肠素高10倍以上。适用于报告基因分析。 | 466 | 0.75 | 16 | 6-30 |
SY0239 | 腔肠素hcp | 腔肠素hcp-水母发光蛋白复合物的荧光强度比天然腔肠素复合物高190倍,且量子产量高和Ca2+反应速度快。 | 445 | 0.65 | 500 | 2-5 |
SY0238 | 腔肠素cp | Coelenterazine cp光蛋白复合物的发光强度是天然腔肠素的15倍,且具有更快的Ca2+反应性。 | 442 | 0.63 | 28 | 2-5 |
SY0237 | 腔肠素f | 腔肠素f-光蛋白复合物的发光强度是天然腔肠素的20倍。其具有最好的细胞渗透性。当需要极高的检测Ca2+灵敏度研究水母蛋白再生实验研究中,推荐使用本底物。 | 472 | 0.80 | 20 | 6-30 |
SY0240 | 腔肠素n | 所有的腔肠素衍生物中荧光强度是最弱的,且对Ca2+反应速率也明显低于天然腔肠素。非常有用的Ca2+低灵敏检测底物。 | 468 | 0.25 | 0.15 | 6-30 |
SY0241 | 腔肠素e | 具有最高的体外水母发光蛋白反应性,且具有双发射峰,可在pCa5~7范围内通过双波长的比例测定Ca2+浓度,从而提高检测精确性。腔肠素e的荧光强度是天然腔肠素的137%。 | 405 &465 | 0.5 | 4 | 0.15-0.3 |
SY0242 | 二甲基腔肠素 | 可高效作用于ROS(如单态氧、超氧阴离子),是一种已报道的强抗氧化剂。 | / | / | / | / |
SY0825 | 腔肠素400a | BRET研究中Rluc的底物。在390nm和400nm之间发蓝色光,对GFP受体蛋白的光发射干扰最小。不可作为Gluc底物。 | 400 | / | / | / |
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